理化检验-化学分册

作者：武洋, 董娜, 张爱菊, 张小林

关键词：中性红, 褪色光度法, 过氧化氢酶, 活性, 白菜

建立了一种中性红（NR）褪色光度法测定过氧化氢酶（CAT）活性的方法。称取20 g本地大白菜样品，研碎，用磷酸盐缓冲溶液（pH 7.0）定容至1 000.0 mL，取稀释液1.00 mL于50 mL容量瓶中，再加入1 mmol·L-1 H2O2基质溶液5.00 mL，在25℃下进行酶催化反应15 min后，立即加入0.01 mol·L-1酸性Fe3+溶液（内含0.02 mol·L-1 H2SO4溶液）1.00 mL用于终止酶促反应（H2SO4）和催化褪色反应（Fe3+），再加入5×10-4mol·L-1 NR溶液3.00 mL，摇匀，在80℃水浴中进行褪色反应，25 min后加水定容。取适量样品溶液于1 cm比色皿中，以水为参比，于波长528 nm处测量其吸光度A。同时完成空白试验吸光度A0测定，根据吸光度的变化ΔA（ΔA=A0-A）确定CAT的活性（E）。结果表明：在10 min内，酶促反应符合一级动力学反应的特征，CAT活性E在0.3 U·mL-1内与ΔA呈线性关系，检出限（3S/N）为0.006 8 U·mL-1。对大白菜的叶、茎、根进行加标回收试验，CAT的含量依次为6.25，9.00，8.00 U·g-1，回收率均为104%，测定值的相对标准偏差（n=6）为1.7%~3.4%。将大白菜茎部自然放置4 d后，CAT活性降至最初的30%。

来源：2020年第6期

《理化检验-化学分册》期刊编辑部

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