理化检验-化学分册

作者：张伟, 张雪梅, 李典晏, 余鸿燕, 曾婷婷, 杨晓霞

关键词：蚯蚓, CYP2A6,CYP2B6,CYP2C8,CYP2D6, 探针底物法, 高效液相色谱-串联质谱法, 土壤污染, 多壁碳纳米管

基于探针底物法，将蚯蚓微粒体悬浮液加入至含有混合探针底物香豆素（50 μmol&#183;L-1）、安非他酮（25 μmol&#183;L-1）、阿莫地喹（50 μmol&#183;L-1）、右美沙芬（5 μmol&#183;L-1）的孵育体系中（微粒体蛋白质量浓度需控制在32~96 mg&#183;L-1内），于37℃孵育20 min后，加入甲醇终止反应，静置10 min后过0.22 μm滤膜，采用高效液相色谱-串联质谱法测定对应的代谢物7-羟基香豆素、羟基-安非他酮、N-脱乙基阿莫地喹、右啡烷的生成量。根据相应代谢物的生成量分别评价蚯蚓CYP2A6、CYP2B6、CYP2C8及CYP2D6酶活力。采用Acquity UPLC HSS T3柱作为分离柱，以不同体积比的含1 mmol&#183;L-1乙酸铵的0.05%（&#966;）甲酸溶液和甲醇的混合溶液作为流动相进行梯度洗脱，串联质谱中采用电喷雾离子源正离子模式和多反应监测模式检测，并用基质匹配法配制混合标准溶液系列。结果显示：7-羟基香豆素、羟基-安非他酮、N-脱乙基阿莫地喹、右啡烷的质量浓度均在2.5~50 μg&#183;L-1内与其对应的峰面积呈线性关系；对空白样品进行3个浓度水平的加标回收试验，回收率为73.7%~103%，日内相对标准偏差（RSDs，n=5）为2.1%~11%，日间RSDs （n=5）为4.6%~10%。方法用于分析分别暴露于多壁碳纳米管染毒土壤（暴露组）和普通土壤（对照组）21 d后蚯蚓体内4种CYP同工酶的活力，CYP2C8酶活力明显高于CYP2A6、CYP2B6及CYP2D6，暴露组中CYP2A6及CYP2C8酶活力显著（P<0.05）高于对照组，而CYP2B6及CYP2D6酶活力与对照组的无显著性差异，因此推测可将CYP2A6及CYP2C8作为一套生物标记物，用于定性诊断土壤的多壁碳纳米管污染。

来源：2022年第2期

《理化检验-化学分册》期刊编辑部

查看理化检验-化学分册杂志2022年第2期