理化检验-化学分册

作者：罗娇依, 郑越男, 刘彤彤, 曹进, 郭亚辉, 孙姗姗

关键词：大西洋鲑, 生物标志性肽段, <i>β</i>-小清蛋白, 特异性肽段, 蛋白质组学

基于蛋白质组学自下而上研究策略,采用纳升液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用法(Nano-UHPLC-Q/Exactive-HRMS)和超高效液相色谱-串联质谱法(UHPLC-MS/MS)筛选、鉴定大西洋鲑中生物标志性肽段和过敏原β-小清蛋白特异性肽段,并提出了UHPLC-MS/MS测定其含量的方法。称取5g处理好的样品,加入10mL正己烷除脂,离心,于沉淀中加入5mL磷酸盐缓冲溶液(提取剂),涡旋,于60℃水浴加热30min,再用20mL冷丙酮富集、纯化,得到的蛋白提取液经胰蛋白酶酶解后,采用Nano-UHPLC-Q/Exactive-HRMS初步筛选大西洋鲑生物标志性肽段与过敏原β-小清蛋白特异性肽段,用UHPLC-MS/MS对初筛的肽段进行多反应监测(MRM)模式验证。在酶解后的溶液中加入内标,采用UHPLC-MS/MS测定,内标法定量。结果显示:筛选出3条可用于定量的大西洋鲑生物标志性肽段VAVNVEETK、VAPLSEDFK、LTEIQSLER和1条过敏原β-小清蛋白特异性肽段TFFHTIGFASK;VAVNVEETK、VAPLSEDFK、LTEIQSLER标准曲线的线性范围在5.00μmol&#183;L-1以内,TFFHTIGFASK标准曲线的线性范围在10.00μmol&#183;L-1以内,检出限(3S/N)为0.32~1.55μg&#183;g-1;空白样品中4条肽段的加标回收率为90.2%~105%,测定值的相对标准偏差(n=6)为1.5%~4.6%;方法用于测定大西洋鲑贮存过程中VAVNVEETK、VAPLSEDFK、LTEIQSLER、TFFHTIGFASK的含量,LTEIQSLER和TFFHTIGFASK含量没有发生明显变化,而VAVNVEETK和VAPLSEDFK含量随着贮存天数的延长逐渐降低,其中VAPLSEDFK适用于大西洋鲑新鲜度评价。

来源：2023年第1期

《理化检验-化学分册》期刊编辑部

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