理化检验-化学分册

作者：董娜, 李文莉, 张爱菊, 戴兴德, 张小林

关键词：过氧化氢酶, 亚甲基蓝, 过氧化氢, 褪色分光光度法

基于芬顿试剂(H2O2/Fe2+)-亚甲基蓝(MB)体系,提出了褪色分光光度法测定人血清中过氧化氢酶(CAT)活性。取样品10μL,加入1mmol·L-1H2O2底液3.00mL,于30℃恒温反应15min,加入1.00mol·L-1H2SO4溶液1.00mL终止酶促反应,充分振荡后依次加入0.10mmol·L-1MB溶液5.00mL和0.01mol·L-1FeSO4溶液1.00mL,室温反应5min后用水定容至50mL。以水为参比,测定体系在波长665nm处的吸光度,随同测定CAT空白体系吸光度,以二者差值(△A)计算CAT活性。结果表明:还原型染料MB于665nm处有最大吸收,摩尔吸光系数为9.5×104L·mol-1·cm-1,Fe2+催化H2O2氧化MB发生褪色反应,CAT对其具有抑制作用;CAT活性在0.01~0.06 U·mL-1内与△A呈线性关系,检出限(3s/k)为0.0024 U·mL-1;方法用于6个不同年龄健康人血清样品分析,结果显示CAT活性为36.3~63.2 U·mL-1,并且儿童和老人血清中CAT活性明显高于成年人,测定值的相对标准偏差(n=6)为1.7%~3.6%,加标回收率为92.0%~104%。

来源：2023年第1期

《理化检验-化学分册》期刊编辑部

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