理化检验-化学分册

作者：徐明雅, 单淼江, 汪凯骏, 申屠婉铃, 丰文燕

关键词：高效液相色谱法, 脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）, 玉米赤霉烯酮（ZEN）, 黄曲霉毒素B₁（AFB₁）, 小麦

国家标准方法均为单种真菌毒素的单独检测，而非多种真菌毒素的联合检测，且柱前衍生需要衍生试剂，文献方法中柱后衍生也需要额外配备衍生装置等。为此，提出了题示方法。取过425 μm的标准网筛的小麦样品，加入5倍的80%（体积分数）乙腈溶液回旋振荡提取30 min或涡旋振荡提取20 min，离心、过滤后，分取5 mL上述滤液，加入磷酸盐缓冲（PBS）溶液35 mL稀释混匀，采用三合一免疫亲和柱替代单一免疫亲和柱，应用全自动固相萃取仪替代人工完成净化，实现了脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）、玉米赤霉烯酮（ZEN）、黄曲霉毒素B1 （AFB1）等3种真菌毒素的同步净化。净化洗脱液经氮吹浓缩、30% （体积分数）甲醇溶液复溶、过0.22 μm滤膜后，以Waters AltantisTM T3 C18色谱柱为固定相，以不同体积比的甲醇-水混合液为流动相梯度洗脱，采用高效液相色谱法同时测定3种真菌毒素的含量。其中，DON由前端的光电二极管阵列检测器检测，ZEN和AFB1由后端的荧光检测器检测。高含量甲醇流动相中的样品溶液流经光电二极管阵列检测器时不仅实现了对DON的定量检测，同时实现了AFB1的光化学衍生和荧光响应值的提升，从而建立了一次前处理、一针进样、无需额外衍生装置即可同时测定3种真菌毒素的方法。3种真菌毒素的质量浓度在一定范围内与对应的峰面积呈线性关系，DON、ZEN、AFB1的测定下限分别为200，10，0.1 μg·kg−1，均满足国家标准GB 5009.111—2016（DON 200 μg·kg−1）、GB 5009.209—2016（ZEN 17 μg·kg−1）和GB 5009.22—2016 （AFB1 0.1 μg·kg−1）给出的要求。按照标准加入法对空白小麦基质进行回收试验，回收率为89.5%～98.8%，测定值的相对标准偏差（n=6）均小于7.0%。对本方法和国家标准方法得到的3种真菌毒素的测定结果进行配对样本t检验，结果表明两种方法没有显著性差异。

来源：2025年第12期

《理化检验-化学分册》期刊编辑部

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