理化检验-化学分册

作者：钟世豪, 覃仕杨, 冯依曼, 武晓珮, 刘汉晨, 周京辉

关键词：超高效液相色谱-高分辨质谱法, 斑马鱼模型, 代谢路径, 代谢物, 安达琳

基于斑马鱼和人肝微粒体（HLMs）的体内外代谢模型，进行了题示研究。以2 μg·L−1安达琳标准溶液100 mL养殖受精后4个月的2条斑马鱼幼苗100 h，然后加入6 mmol·L−1磷酸盐缓冲溶液（PBS）2 mL，研磨均匀后，于−4 ℃离心15 min。收集全部上清液，过活化好的HLB固相萃取柱，以2 mL水淋洗，2 mL甲醇洗脱后氮吹至干。以由体积比9∶1的含10 mmol·L−1甲酸铵的0.1%（体积分数，下同）甲酸溶液和含0.1%甲酸的甲醇溶液组成的初始流动相0.2 mL复溶后，采用超高效液相色谱-高分辨质谱法（UHPLC-HRMS）检测；另取3 mL斑马鱼养殖水，于−4 ℃离心15 min，上清液采用同样方法净化和分析。将HLMs配套试剂和1 μg·L−1安达琳标准溶液按一定比例充分吹吸混匀，取195 μL并等分成5组，各置于37 ℃条件下孵育5 min后加入5 μL 20 g·L−1 HLMs溶液，吹吸3次混匀后于37 ℃继续孵育4 h，加入200 μL乙腈终止反应，并于−4 ℃离心15 min。将上清液等分成2份，一份添加2 μL甲酸并采用电喷雾离子源（ESI）正离子（ESI+）模式分析，另一份添加甲酸铵0.19 g并采用ESI负离子（ESI−）模式分析。在色谱分析中，在ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱上以含10 mmol·L−1甲酸铵的0.1%甲酸溶液-含0.1%甲酸的甲醇溶液体系分离；在质谱分析中，以ESI+、ESI−模式电离，一级全扫描（FullMS）结合自动触发二级扫描（dd-MS2）进行检测。结果显示：通过斑马鱼模型可获取37种代谢物，HLMs模型可获取16种。37种代谢物共涉及13种代谢路径，包括I相代谢路径7种和Ⅱ相代谢路径6种。其中，I相代谢路径分别为单羟基化、双羟基化、酰胺水解、O-脱烷基化、硝基还原、N-氧化、脱卤（氟）化，Ⅱ相代谢路径分别为甲基化、乙酰化、硫酸化、葡萄糖醛酸化、配糖体化和甘氨酸化。所用斑马鱼具有替代人体样本的可能性，所述的安达琳代谢物和代谢路径可为兴奋剂的检测研究提供技术参考。

来源：2026年第2期

《理化检验-化学分册》期刊编辑部

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